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采血卡干血斑的洗脫與分析
使用一次性使用的6毫米設(shè)備從903級過濾采血卡的每個(gè)血液浸泡的圓圈中打出一個(gè)點(diǎn)。將所有穿孔的干血斑從單個(gè)患者轉(zhuǎn)移到12孔板的一個(gè)孔中。
用含有0.05％吐溫20和0.08％疊氮化鈉的磷酸鹽緩沖鹽水填充孔。使添加的緩沖液的體積適應(yīng)用于隨后分析干血斑洗脫液的測定的最小相應(yīng)要求。重復(fù)這些步驟以獲得第二系列干血斑洗脫液以進(jìn)行分子分析。將細(xì)胞培養(yǎng)板置于實(shí)驗(yàn)室振蕩器上，讓打孔干燥的血斑輕輕洗脫至少4小時(shí)，或優(yōu)選O / N。第二天，斑點(diǎn)幾乎沒有血液并且已形成溶血上清液。將這些洗脫液轉(zhuǎn)移到微量離心管中。然后，使它們以10,500×g離心2分鐘以從洗脫期間形成的任何碎片中釋放上清液。
洗脫液分析
離心洗脫液現(xiàn)在可以用于預(yù)期的分析.使用市售試劑盒研究乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒和HIV感染標(biāo)志物的洗脫液，并仔細(xì)遵循各自制造商的說明。
本通信中提出的用于制備和處理用于免疫測定和分子技術(shù)的干血斑的方案的圖形概述。通過靜脈穿刺或通過刺血針刺穿皮膚獲得的全靜脈血和毛細(xì)血管血液可以用作干血斑分析的樣本。在將血液轉(zhuǎn)移到903級過濾采血卡的圓圈后，樣品應(yīng)在環(huán)境溫度下在生物危害安全柜中優(yōu)選O / N干燥，以形成均勻褐色的斑點(diǎn)，沒有任何紅色的散布地區(qū)。當(dāng)血斑干燥完成并需要儲(chǔ)存時(shí)，濾紙可以包裝在含有1-2個(gè)干燥劑小袋的不透氣的拉鏈袋中。DBS的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)室處理包括通過來自圓心的6mm單次使用裝置產(chǎn)生沖頭，在基于PBS的緩沖液中沖洗沖頭至少4小時(shí)，或者優(yōu)選地，振蕩器上的O / N，洗脫液的回收，最后離心實(shí)驗(yàn)室杯以使DBS洗脫液從洗脫過程期間可能產(chǎn)生的任何碎片中釋放出來。隨后，DBS洗脫液可用于分析，其通過全自動(dòng)平臺(tái)進(jìn)行，以分別檢測HBV，HCV和HIV感染的血清學(xué)標(biāo)志物。請點(diǎn)擊此處查看該圖的放大版本。
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